上海東寰生物科技有限公司即核苷滲入法。以前常用的核苷滲入法是BrdU(胸腺嘧啶核苷酸類似物)法,但BrdU法的缺點是需要變性DNA后才能與抗體結(jié)合,導(dǎo)致了DNA雙鏈結(jié)構(gòu)的破壞,影響了其他染料的結(jié)合染色,導(dǎo)致染色彌散,準(zhǔn)確性降低等問題。EdU法作為新型的核苷滲入法具有以下優(yōu)點:安全—–不使用[3H]thymidine,無放射性污染。簡單—–基于小分子化學(xué)反應(yīng)的檢測方法,簡單高效,需三步:EdU孵育;細胞固定;熒光檢測。無需DNA變性和孵育抗體。上海東寰與您分享EdU細胞增殖檢測試劑盒的重要性。安徽正規(guī)EdU細胞增殖檢測試劑盒優(yōu)勢
上海東寰生物科技有限公司細胞的固定和通透(a)每孔加入150ul4%多聚甲醛細胞固定液,室溫培養(yǎng)30分鐘,棄固定液;(b)毎孔加入150ul2mg/ml甘氨酸,搖床孵育5分鐘,以中和過量的多聚甲醛;(c)棄甘氨酸溶液,每孔加入300ulPBS洗液,室溫清洗5分鐘;(d)每孔加入300ul0.5%TritonX-100細胞通透液,室溫通透10分鐘,棄細胞通透溶液;(e)每孔加入300ulPBS洗液,室溫清洗5分鐘;該產(chǎn)品是采用成像檢測方法對貼壁細胞進行檢測,適用于熒光顯微鏡、共聚焦顯微鏡等儀器。山東正規(guī)EdU細胞增殖檢測試劑盒說明書上海東寰告訴您EdU細胞增殖檢測試劑盒如何去使用呢?
EdU是一種胸腺嘧啶核苷類似物,分子量很小,在動物體內(nèi)能夠迅速擴散到各種組織和中,并滲入正在復(fù)制的DNA分子,通過基于Apollo®熒光染料與EdU的特異性反應(yīng)即可簡單、快速、準(zhǔn)確地檢測出細胞增殖情況。與BrdU檢測方法相比,EdU檢測方法用量小得多,十分之一的用量即可獲得與BrdU檢測試劑盒相同甚至更好的檢測結(jié)果,而且小分子化學(xué)反應(yīng)檢測方法反應(yīng)快,效率高,反應(yīng)時間需幾分鐘,不需要DNA變性、蛋白酶處理、抗原抗體過夜孵育,能夠更好地保護細胞形態(tài),更簡單、更靈敏、更快速、更準(zhǔn)確
EdU檢測法中的點擊反應(yīng)(Clickreaction)原理圖。生物素或熒光探針等標(biāo)記的疊氮化物(LabeledAzide)與摻入到細胞DNA中的EdU,在銅離子的催化發(fā)生共價反應(yīng),形成穩(wěn)定的三唑環(huán),終使細胞DNA標(biāo)記上生物素等探針。本試劑盒反應(yīng)簡單、檢測靈敏度高。本試劑盒基于簡單高效的點擊反應(yīng),無需DNA變性,只需少量的小分子疊氮化物探針即可非常有效地標(biāo)記出摻入的EdU,并且可以檢測到單個細胞的增殖情況。本試劑盒使用便捷、兼容性好。通過點擊反應(yīng),新合成的DNA會被相應(yīng)的生物素探針?biāo)鶚?biāo)記,從而可以使用適當(dāng)?shù)臋z測設(shè)備檢測到增殖的細胞。EdU細胞增殖檢測試劑盒的作用是什么?上海東寰告訴您。
細胞增殖是生活細胞的重要生理功能之一,是生物體的重要生命特征。細胞的增殖是生物體生長、發(fā)育、繁殖以及遺傳的基礎(chǔ)。方式:真核生物的分裂依據(jù)過程不同有三種方式,有有絲分裂,無絲分裂,減數(shù)分裂。其中有絲分裂是人、動物、植物、等一切真核生物中的一種為普遍的分裂方式,是真核細胞增殖的主要方式。減數(shù)分裂是生殖細胞形成時的一種特殊的有絲分裂。多細胞生物,以細胞分裂的方式產(chǎn)生新的細胞,用來補充體內(nèi)衰老或死亡的細胞EdU細胞增殖檢測試劑盒的發(fā)展趨勢如何?安徽正規(guī)EdU細胞增殖檢測試劑盒優(yōu)勢
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搖床孵育5分鐘,以中和過量的多聚甲醛;(c)棄甘氨酸溶液,每孔加入300ulPBS洗液,室溫清洗5分鐘;(d)每孔加入300ulTritonX-100細胞通透液,室溫通透10分鐘,棄細胞通透溶液;(e)每孔加入300ulPBS洗液,室溫清洗5分鐘;染色反應(yīng)液組分500ul1ml2ml5mlIX反應(yīng)緩沖液430ul860ulmlml催化劑溶液20ul40ul80ul200ulTAMRA紅色熒光溶液ulul5ulul緩沖添加劑50ul100ul200ul500ul(d)每孔加入100ul配置好的檢測混合液,以覆蓋細胞為宜,避光、室溫孵育30分鐘。(e)棄染色反應(yīng)液,加入300ulTritonX-100細胞滲透液清洗2-3次,每次10分鐘;(f)棄細胞滲透液,用PBS洗兩次,每次5分鐘。DNA染色(a)將Hoechst33342用PBS溶液1:1000進行稀釋得到終濃度為5ug/ml的lxHoechst染色液;(b)每孔加入300ul1xHoechst染色液,室溫避光孵育20-30分鐘后,棄染色液;(c)每孔加入300ulPBS洗細胞兩次,去掉洗液。安徽正規(guī)EdU細胞增殖檢測試劑盒優(yōu)勢