狀病毒的發(fā)現(xiàn),病原宏基因組測(cè)序功不可沒(méi)。對(duì)一種新病毒進(jìn)行鑒定和檢測(cè),其中非常關(guān)鍵的步驟就是獲得病毒的全基因組信息。在此次病情監(jiān)測(cè)和防控中,病原宏基因組測(cè)序發(fā)揮了至關(guān)重要的作用,利用其技術(shù)優(yōu)勢(shì),研究人員在五天內(nèi)就鑒定并分析出冠狀病毒的基因組,而2003年SARS的鑒定耗時(shí)5月余、2013年H7N9的鑒定耗時(shí)1月余。冠狀病毒2019-nCoV為線(xiàn)性單鏈RNA(ssRNA)病毒,基因組全長(zhǎng)包含29903個(gè)核苷酸,10個(gè)基因。病毒基因組序列為進(jìn)一步分析其傳染機(jī)理,傳播途徑,藥物靶點(diǎn)等提供了有利的支持。樣品具備什么條件才能獲得比較質(zhì)量的宏基因組分析效果?上海病毒宏基因組測(cè)序分析方法
上海探普生物科技有限公司對(duì)樣本進(jìn)行宏病毒組測(cè)序具有的優(yōu)勢(shì):全國(guó)開(kāi)設(shè)病毒宏基因組測(cè)序的公司不超過(guò)3家,只有探普生物是專(zhuān)門(mén)為病毒研究者服務(wù)的,探普生物的研發(fā)團(tuán)隊(duì)和實(shí)驗(yàn)團(tuán)隊(duì)都來(lái)自全國(guó)各地病毒學(xué)、微生物學(xué)專(zhuān)業(yè)的高校,碩士及以上學(xué)歷成員超過(guò)60%,團(tuán)隊(duì)具備普通測(cè)序?qū)嶒?yàn)和分析基礎(chǔ)之外,同時(shí)具備病毒學(xué)及微生物學(xué)的學(xué)術(shù)背景,相當(dāng)了解病毒相關(guān)樣本情況、研究方向等。研究者在項(xiàng)目咨詢(xún)的時(shí)候就可以明顯感覺(jué)到探普生物的專(zhuān)業(yè)性,溝通順暢,省時(shí)省力。山東宏病毒學(xué)測(cè)序分析找哪家DNA宏基因組測(cè)序的病原檢出率均高于培養(yǎng)等傳統(tǒng)方法,表現(xiàn)出好的診斷性能。
傳統(tǒng)上人類(lèi)血液被認(rèn)為是無(wú)菌的,微生物血漿細(xì)胞游離DNA(mcfDNA)可能有兩種來(lái)源,包括微生物(細(xì)菌,病毒或噬菌體)的易位,這是指屬于人類(lèi)微生物組的微生物細(xì)胞或其組成部分通過(guò)與外部環(huán)境連通的上皮粘膜進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)。另外,當(dāng)組織粘膜被局部傳染(例如口腔,肺和皮膚傳染)或物理?yè)p傷(例如侵入性的手術(shù)或意外傷害)破壞時(shí),侵入性的病原體可能會(huì)偶然進(jìn)入血液,在嚴(yán)重的情況下引起菌血癥或病毒血癥。一旦進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng),微生物核酸就會(huì)通過(guò)循環(huán)核酸外切酶被降解,然后形成小的DNA的片段,即微生物血漿細(xì)胞游離DNA(mcfDNA)。mcfDNA是一種新興的傳染性疾病診斷生物標(biāo)志物。盡管絕大多數(shù)cfDNA來(lái)自于患者自身的細(xì)胞,但在急性傳染期間可從血漿中檢測(cè)到微生物病原體的微量物質(zhì)。
宏病毒組是病毒的宏基因組,該技術(shù)是隨著高通量測(cè)序技術(shù)的興起而發(fā)展起來(lái)的。該技術(shù)主要是使用大量微生物群體樣本的測(cè)序數(shù)據(jù)和生物信息學(xué)分析手段,以多種數(shù)據(jù)庫(kù)為基礎(chǔ),進(jìn)行群體的種類(lèi)和功能分析。因此,它主要的應(yīng)用場(chǎng)景在于微生物群體研究,如腸道微生物、皮膚微生物、口腔微生物、水體微生物、土壤微生物等。一直以來(lái)宏基因組技術(shù)都是在細(xì)菌領(lǐng)域使用,病毒的樣本收集困難、文庫(kù)構(gòu)建繁瑣、數(shù)據(jù)庫(kù)不完善,因此宏基因組技術(shù)未能獲得普遍應(yīng)用。上海探普生物科技有限公司立志專(zhuān)門(mén)解決病毒方向的基因組研究難題,開(kāi)發(fā)了整套的樣本處理和生信分析流程,基于這套流程,研究者們想對(duì)樣本進(jìn)行宏病毒組測(cè)序就很容易實(shí)現(xiàn)了。宏基因組測(cè)序是通過(guò)比對(duì)數(shù)據(jù)庫(kù),得到病原體的信息。
優(yōu)化臨床制備病毒宏基因組測(cè)序所用樣本的方法:①介紹高通量病毒宏基因組測(cè)序的樣本制備步驟,對(duì)臨床樣本的總核酸進(jìn)行隨機(jī)擴(kuò)增;②檢測(cè)了從血漿樣本中富集/擴(kuò)增DNA及RNA病毒的不同方法,一種包括過(guò)濾、核酸酶消化、在不同反應(yīng)中隨機(jī)擴(kuò)增DNA及RNA的步驟是較好的;③隨后在包含了不同病毒科的樣本中驗(yàn)證此方法,可高讀數(shù)地檢測(cè)到大多數(shù)病毒序列,且優(yōu)于現(xiàn)行的其它樣本制備方法;④該方法不只適用于血漿樣本,還可用于尿液、咽喉拭子等臨床樣本。宏基因組測(cè)序技術(shù)不依賴(lài)于微生物的分離培養(yǎng)。宏病毒組測(cè)序公司
高通量測(cè)序技術(shù)能夠提供準(zhǔn)確而科學(xué)的基因測(cè)序分析結(jié)果,為病情防控提供有力技術(shù)保障。上海病毒宏基因組測(cè)序分析方法
對(duì)樣本進(jìn)行宏病毒組測(cè)序具有的意義:和細(xì)菌的宏基因組相似,病毒宏基因組也是旨在研究微生物群體中的物種分布規(guī)律和差異,通過(guò)大數(shù)據(jù)分析微生物群體的功能。通過(guò)對(duì)樣本進(jìn)行宏病毒組測(cè)序,我們可以了解單個(gè)樣本里有什么病毒,相對(duì)含量是多少,優(yōu)勢(shì)物種是什么;還可以了解不同群體間物種分布有何差異,結(jié)合樣本來(lái)源和其所屬環(huán)境,指導(dǎo)下游的實(shí)驗(yàn)方向。于科研,好的群體和樣本可以發(fā)表質(zhì)量的學(xué)術(shù)論文;于臨床,可以輔助臨床醫(yī)生進(jìn)行微生物侵染類(lèi)疾病診斷并在一定程度提供用藥指導(dǎo)。隨著數(shù)據(jù)庫(kù)日趨完善,對(duì)樣本進(jìn)行宏病毒組測(cè)序以后,我們將獲得越來(lái)越豐富的信息,它有朝一日會(huì)成為研究者非常常規(guī)的研究手段。上海病毒宏基因組測(cè)序分析方法